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CF-1 MEF 细胞

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF):灭活的MEF即为Feeder

当前,全球范围内关于胚胎干细胞(ESC)与诱导多能干细胞(iPSC)的各项研究正蓬勃开展。


胚胎干细胞(ESC)源于囊胚内细胞团,是全能干细胞,具有向外胚层、内胚层、中胚层分化的能力,可分化为各类细胞。与其他干细胞不同,ES 细胞具备无限增殖能力。诱导多能干细胞(iPSC)由体细胞在体外经重编程获得,与胚胎干细胞类似,也是全能干细胞。但 ESC 与 iPSC 在体外培养时极易自发分化。


为保持ESC 与 iPSC 的多能性,需在培养体系中加入抑制分化因子或在饲养层体系中维持培养。


饲养层培养体系是ESC 体外培养建系常用技术方法。饲养层细胞(Feeder)是经 γ- 射线照射和丝裂霉素 C(Mito-C)处理、阻断细胞有丝分裂后得到的细胞单层。目前最常用的饲养层是小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)。MEF 在生长过程中,可通过表达黏附分子和产生细胞外基质(ECM)支持 ES 或 iPSC 附着,还能分泌生长因子如胰岛素样生长因子、成纤维细胞生长因子(FGF)等促有丝分裂因子以及白血病抑制因子(LIF)等细胞分化抑制因子,促进 ES 或 iPSC 增殖并抑制细胞分化。


四倍体补偿技术对胚胎干细胞(ES 细胞)的多能性有着极高的要求,高质量的胚胎干细胞(ES 细胞)离不开高质量的饲养层细胞(feeder 细胞)。明迅生物在四倍体补偿技术方面取得了如此大的创新成果,不断优化改进的 Feeder 细胞功不可没。


明迅的feeder特色在哪?


01. 滋养能力强

培养的ESC/iPSC呈隆起状态,克隆边缘清晰,细胞透亮,紧密度良好,无分化现象。

在胚胎干细胞(ES 细胞)研究领域,四倍体补偿技术作为检验 ES 细胞质量的金标准。采用明迅生物制备的饲养层细胞(Feeder)培养的 ES 细胞进行四倍体补偿实验,小鼠出生率可达30%-60%,而已有文献报道只有 1%-5%左右。


02. 预灭活处理:

饲养层细胞经过丝裂霉素C(Mito-C)预灭活处理,复苏后即可使用,这一处理方式为实验人员节省了至少两周的时间。经过处理的细胞已完全灭活,几乎不再增殖,为胚胎干细胞的培养提供了稳定的生长环境。


03. 抗性丰富:

该饲养层细胞含有多种抗性及其组合,能够满足各种不同的实验需求,包括Neo、puro、BSD、Hygro 等抗性。这使得实验人员可以根据具体的实验要求选择合适的饲养层细胞,提高实验的灵活性和成功率。


04. 复苏存活率高:

细胞复苏后的贴壁率大于80%,细胞形态良好,呈立体的细长梭形。高复苏存活率和良好的细胞形态保证了饲养层细胞能够迅速发挥其支持胚胎干细胞生长的作用,为胚胎干细胞的培养提供了可靠的保障。


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                                                                     图1 CF-1 Feeder培养体系下的hESC(明迅生物)

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                                                                    图2 CF-1 Feeder培养体系下的mESC(明迅生物)


2、那我们有哪些产品呢?


明迅提供未经处理的MEF细胞用于进一步扩增,也提供经过处理可直接用作饲养层的细胞。详见下表:

产品名

产品说明

用途

ICR MEF

P1代,未灭活

传代增殖制备feeder

ICR Feeder

即ICR MEF(灭活),为P3代灭活冻存

常规小鼠或人ESC/iPSC培养,支撑能力强

129/OG2 MEF


重编程iPSC

CF-1 MEF


P1代,未灭活,可传代增殖制备feeder

CF-1 Feeder

即CF-1 MEF(灭活)为P3代灭活冻存

常规小鼠或人ESC/iPSC培养,支撑能力比ICR feeder更强,尤其是培养人ESC/iPSC

NPBH四抗性Feeder(C57BL/6小鼠背景)

具有Neo、puro、Blasticidin(BSD)、Hygrometer四种抗性

小鼠或人ESC/iPSC培养过程中的药物选择


3、Feeder细胞如何制备?


Feeder 细胞的制备过程如下:首先,从孕 13.5 天的小鼠胚胎中获取胚胎组织,经过分离纯化操作得到 P0 代小鼠胚胎成纤维细胞(MEF 细胞)。接着,对 MEF 细胞进行传代扩增培养,然后使用丝裂霉素 C 进行处理,使 MEF 细胞丧失增殖能力,此时的 MEF 细胞即可称为 Feeder 细胞。随后,将制备好的 Feeder 细胞进行冻存处理,并置于液氮罐中冷冻保存。在制备过程中,通过细胞形态观察、活性检测以及支原体检测等多种检测方法对 Feeder 细胞进行质量控制

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                                                                  图3 Feeder制备流程

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                                               图4(A)为CF-1 Feeder复苏后Day1细胞形态       图4(B)为CF-1 Feeder复苏后Day6细胞形态





已发表论文

[1] Liu FL, Wu K, Sun J, Duan Z, Quan X, Kuang J, Chu S, Pang W, Gao H, Xu L, Li YC, Zhang HL, Wang XH, Luo RH, Feng XL, Schöler HR, Chen X, Pei D, Wu G, Zheng YT, Chen J. Rapid generation of ACE2 humanized inbred mouse model for COVID-19 with tetraploid complementation. Natl Sci Rev. 2020 Nov 24;8(2):nwaa285. doi: 10.1093/nsr/nwaa285.   IF:16.693

[2] Wang G, Yang ML, Duan ZL, Liu FL, Jin L, Long CB, Zhang M, Tang XP, Xu L, Li YC, Kamau PM, Yang L, Liu HQ, Xu JW, Chen JK, Zheng YT, Peng XZ, Lai R. Dalbavancin binds ACE2 to block its interaction with SARS-CoV-2 spike protein and is effective in inhibiting SARS-CoV-2 infection in animal models. Cell Res. 2021 Jan;31(1):17-24. doi: 10.1038/s41422-020-00450-0. Epub 2020 Dec 1. IF:20.507

[3]Xia B, Shen X, He Y, Pan X, Liu FL, Wang Y, Yang F, Fang S, Wu Y, Duan Z, Zuo X, Xie Z, Jiang X, Xu L, Chi H, Li S, Meng Q, Zhou H, Zhou Y, Cheng X, Xin X, Jin L, Zhang HL, Yu DD, Li MH, Feng XL, Chen J, Jiang H, Xiao G, Zheng YT, Zhang LK, Shen J, Li J, Gao Z. SARS-CoV-2 envelope protein causes acute respiratory distress syndrome (ARDS)-like pathological damages and constitutes an antiviral target. Cell Res. 2021 Aug;31(8):847-860. doi: 10.1038/s41422-021-00519-[4] Epub 2021 Jun 10.   IF:20.507

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