IVF 快速扩繁：让实验小鼠的繁殖不再受限！

IVF快速扩繁

IVF快速扩繁通过体外受精技术，利用1-2只基因型准确的雄鼠精子与超排雌鼠的卵母细胞结合，形成胚胎后移植至假孕母鼠体内，最终获得大量周龄一致的后代。

传统的小鼠自然繁殖方式，面临的繁殖周期长、种群扩繁效率低、病原体净化困难等问题都可以通过IVF解决。

IVF特点

优点：

• 1-2只genotype正确的雄鼠可在45天后获得至少50只或更多后代，后代出生日期一致，一般相差在2-3天内；极大减少实验误差。

• 针对雄性不育、老龄化或濒危品系，IVF技术可提取其精子进行体外受精，确保遗传资源延续。

• 假孕母鼠（受体）符合 SPF 级，后代质量有保证。

缺点：

• 更适合卵子提供者是易得到的雌性野生型小鼠，如B6；

• 更适合需求的后代是杂合子小鼠。假如需要纯合子，需要再次交配或IVF得到； IVF核心操作步骤

1、超数排卵与卵子采集

激素处理：选取 3-4 周龄雌性小鼠，16:30 注射 PMSG 10 IU/只，47 小时后注射 hCG 10.0 IU/只。

卵子获取：注射 hCG 16 小时后处死雌鼠，分离输卵管，用 M2 培养基冲洗输卵管壶腹部，收集卵丘-卵母细胞复合体（COCs），并将其转移至 HTF 培养液滴中备用。

2、精子采集与获能

雄鼠准备：选择 8-24 周龄健康雄鼠，颈椎脱臼处死后迅速取附睾尾，置于含 5% 血清替代品（SPS）的 IVF 培养液中。

精子获能：用眼科剪横断附睾尾释放精子，37℃培养箱孵育 1 小时，精子游向液滴边缘即表示获能成功。

3、体外受精

精卵共孵育：将 COCs 转移至受精滴（含 HTF 培养液），按每 10 枚卵子加入 5-15μL 获能精子，37℃、5% CO₂ 培养箱中孵育 6-7 小时。

受精卵筛选：次日观察受精卵，确认原核形成或发育至 2 细胞期胚胎，计算受精率（2 细胞胚胎数/总卵数）。

4、胚胎移植

假孕母鼠制备：提前将结扎雄鼠与正常雌鼠合笼诱导假孕，选择见栓后 0.5 天（输卵管移植）或 2.5 天（子宫移植）的受体。

移植操作：在体式显微镜下，将 10-15 枚 2 细胞胚胎通过输卵管伞口或管壁切口移植至受体，术后护理需注意保温及抗生素预防感染。

妊娠监测：移植后 19-21 天观察母鼠分娩，新生鼠 21 天离乳即可用于实验。

问题及解决方法